调节性T细胞(Treg)检测试剂盒(流式细胞仪法)
--“免疫刹车”细胞，预警自身免疫病、肿瘤免疫逃逸及移植排斥风险
样本类型：EDTA抗凝血
校准品：请根据所用流式细胞仪型号选用厂家要求配套的校准品
质控品：请根据所用流式细胞仪型号选用厂家推荐的质控品
配套仪器：中生BioCyte、FlowCyte/ZS-AE7S、FACSCantoII、FACSCalibur、DxFLEX、Navios、NovoCyte、BriCyte E6等流式细胞仪
指标简介
调节性T细胞(regulatory T cell，Treg)是一群起源于胸腺的CD4+T淋巴细胞亚群，该类细胞占外周血、脾脏和淋巴组织CD4+T淋巴细胞的5-10%。Treg细胞发现于1995年由日本生物学家坂口志文教授发现并命名，发现将其去除，则会诱发小鼠自身免疫性疾病；若将其回输，则阻止自身免疫性疾病的发生，因此命名为调节性T细胞（Regulatory cell，简称Treg）。Treg细胞主要通过分泌抑制性细胞因子或接触抑制的方式抑制T细胞的活化和增殖，积极参与免疫自我耐受的维持，对抗不良免疫反应，通过阻止过度的免疫反应、炎症和组织破坏来调节免疫稳态，维持机体免疫平衡。Treg细胞是体内一类重要的免疫细胞，对人体的免疫调控以及免疫稳态的维持至关重要，其数量异常或功能异常都会对人体产生影响。通过检测 Treg 细胞可以帮助临床评估患者机体的免疫状态，此外，通过监测Treg细胞的改变，有助于进行药物疗效评价及预后分析，从而制定更为有效的治疗方案。
检测原理
流式细胞仪法：待测样本的细胞悬液，在鞘液的包围和约束下，细胞排成单列高速由流动室喷嘴喷出，形成细胞液柱。当液柱通过检测区，在入射的激光束照射下产生前向角散射光（FSC）和侧向角散射光（SSC），它们分别反映细胞大小和颗粒度，根据这些特性可以将细胞分类。经一种或几种特殊荧光标记的样本，在激光束的激发下所产生的特定荧光，可被光学系统检测并输送到计算机进行分析，得到细胞相应的各种特性。
临床应用
- Treg与肿瘤：Treg的主要功能是抑制自身免疫应答，维持免疫平衡，避免过度的炎症反应和自身免疫性疾病的发生，在免疫系统中发挥重要的负向调控作用。在血液肿瘤中，Treg一方面可以通过抑制对肿瘤细胞的免疫反应来促进肿瘤生长;另一方面也可通过抑制炎症和防止可能导致肿瘤发展的自身免疫反应而发挥保护作用。研究发现，多种类型的血液肿瘤患者Treg数量呈现上升趋势，可能会导致肿瘤免疫逃逸的发生[2]。对于非小细胞肺癌，II/IV期患者术后外周血 Treg 细胞的比例高于健康对照人群，研究结果提示 Treg 细胞比例与非小细胞肺癌病理分期及肿瘤负荷相关，晚期非小细胞肺癌患者外周血 Treg 细胞高水平与更差的临床结局相关，因此，外周血 Treg细胞检测具有很高的意义，为指导非小细胞肺癌患者个体化治疗方案的选择提供了额外的参考[3]。
- Treg与移植排斥反应：调节性T细胞(Treg)是机体建立免疫耐受的重要抑制性免疫细胞，在调控机体过度免疫应答和自身免疫性疾病中发挥着重要作用。在移植免疫耐受相关研究中，增加体内Treg数量或增强其功能已被证明是一种能够诱导移植免疫耐受的治疗策略[4]。Treg细胞在移植早期通常比例非常低，移植晚期逐渐增多[2]。多项临床研究表明，移植术后发生排斥反应的患者观察到Treg细胞的显著性降低伴随效应T细胞及相关细胞因子的升高，提示术后进行Treg细胞相关免疫监测可能有助于预测排斥反应发生风险[3]。
- Treg与感染：Treg细胞在感染早期或缓解期高表达，可以抑制免疫应答，但却延长了慢性感染;发病后应答能力下降，机体免疫应答加强，以使机体加快清除病菌。动态观察Treg细胞可了解疾病的进程与转归。
- Treg与自身免疫性疾病：自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎(RA)等，就是因为自身免疫力超常表达，把机体正常组织当作攻击对象，造成机体的损害。Treg细胞对机体的免疫反应起到负性调节作用，抑制机体免疫反应和对自身抗原的主动耐受，从而避免自身免疫疾病的发生。Treg高表达，提示患者处于免疫抑制状态，提示免疫抑制剂使用过量或者感染风险增加;Treg低表达，提示免疫抑制剂应用不足、提示自身免疫性疾病发病期。通过监控并调控Treg表达能够指导免疫抑制剂的使用，控制亢进的免疫功能，改善自身免疫性疾病患者整体预后。
- Treg与复发性流产：目前，Treg细胞在妊娠免疫耐受中发挥极其重要的作用，已被公认为维持母胎免疫耐受的重要因素之一，其水平的降低与子痫前期、胎儿生长受限和习惯性流产密切相关。与正常妊娠妇女相比，习惯性流产患者卵泡期Treg细胞数量和功能明显下降。Treg细胞数量和功能的下降还与原因不明的复发性自然流产有关[3]。
适用科室
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适用科室 |
适应疾病 |
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感染科 |
结核患者：外周血及感染灶中Treg细胞比例上升，可抑制抗原特异性T细胞分泌IFN-γ并削弱巨噬细胞对病原体的吞噬作用。 |
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肿瘤科 |
在癌症患者体内，调节性T细胞活性升高，可以导致机体对肿瘤细胞产生抗原耐受，从而使肿瘤细胞逃过机体的免疫杀伤，阻碍机体抑制癌细胞的增殖。对人和动物模型的研究显示，在肿瘤微环境中存在大量的调节性T细胞会导致不良预后。 |
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血液科 |
在血液病及骨髓移植中，评估免疫抑制和移植物抗宿主病的风险 |
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风湿免疫科 |
系统性红斑狼疮（SLE）：活动期外周血中Treg细胞表达增加，且与SLE分期相关。 |
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生殖中心 |
在生殖免疫领域，评估免疫因素对生育能力的影响 |
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移植科 |
Treg细胞预防排斥反应和建立免疫耐受主要通过减弱 T 细胞免疫反应和控制炎症来实现。急排临床症状出现前1-5天，调节性T细胞升高、CD4/CD8持续升高，预示急排；调节性T细胞和CD4/CD8持续降低，表明可能感染；调节性T细胞继续降低，CD4/CD8<0.2应停用免疫抑制剂。 |
参考文献
[1] 胡珏 and 杨欢, 调节性T细胞及其在自身免疫性疾病治疗中的应用. 国际免疫学杂志, 2006(01): p. 44-47.
[2] 杨再林, et al., 淋巴细胞亚群检测在血液肿瘤中应用的专家共识. 国际检验医学杂志, 2023. 44(15): p. 1793-1802.
[3] 刘锦鹏, 流式细胞术检测外周血调节性T细胞标准化的性能验证方法研究. 2024, 中国医科大学.
[4] 胡露 and 粘烨琦, 从基础研究到临床实践：调节性T细胞在移植免疫耐受中的应用研究进展. 器官移植, 2023. 14(05): p. 745-753.
[5] 中国医师协会检验医师分会, et al., 实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测专家共识. 中华检验医学杂志, 2023(12): p. 1235-1248.
[6] 国家医学检验临床医学研究中心(中国医科大学附属第一医院), et al., 流式细胞术的临床应用专家共识. 中华检验医学杂志, 2023(08): p. 792-801.
指南共识
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序号 |
指南/共识名称 |
要点 |
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1 |
《淋巴细胞亚群检测在血液肿瘤中应用的专家共识（2023版）》[2] |
Treg细胞的标记为CD3+CD4+CD25+FoxP3或CD3+CD4+CD25+CD127lowW。T细胞表面CD127的低表达与T细胞质内FoxP3的高表达具有良好的相关性，且以CD127为标志进行检测方法明显优于以细胞质内FoxP3为标志的检测方法，因此也可以使用CD127替代FoxP3进行Treg细胞的分析。 |
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2 |
《实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测专家共识（2023版）》[5] |
调节性T细胞（regulatory Tcell,Treg细胞）:Treg细胞是CD4*T细胞的免疫负向调节亚群,通过接触性抑制和分泌免疫抑制因子等途径抑制CD4+T和CD8+T细胞的活化、增殖和效应功能,从而抑制细胞免疫应答,以CD3+CD4+CD25+CD127-low或CD3+CD4+CD25+FoxP3+为分子标记。 |
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3 |
《流式细胞术的临床应用专家共识（2023版）》[6] |
Treg检测的单抗为CD4、CD25、CD3、CD127 |
