精子质量检测试剂盒(流式细胞仪法)

--男性生育能力检测指标

样本类型：新鲜精液

校准品：请根据所用流式细胞仪型号选用厂家要求配套的校准品

质控品：请根据所用流式细胞仪型号选用厂家推荐的质控品

配套仪器：中生BioCyte、FlowCyte/ZS-AE7S、FACSCantoII、FACSCalibur、DxFLEX、Navios、NovoCyte、BriCyte E6等流式细胞仪

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指标简介

精子质量检测是诊断男性不育症的重要手段，流式细胞术与常规检测方法相比，不仅具有快速、精确的优点，还可以了解精子的内部结构和功能，是评价精子质量的有效方法。流式细胞术(flowcytomety,FCM)应用于精子质量检测，为精子内部结构和功能的检测提供了一个新的途径和前景。

检测原理

流式细胞仪法：待测样本的细胞悬液，在鞘液的包围和约束下，细胞排成单列高速由流动室喷嘴喷出，形成细胞液柱。当液柱通过检测区，在入射的激光束照射下产生前向角散射光（FSC）和侧向角散射光（SSC），它们分别反映细胞大小和颗粒度，根据这些特性可以将细胞分类。经一种或几种特殊荧光标记的样本，在激光束的激发下所产生的特定荧光，可被光学系统检测并输送到计算机进行分析，得到细胞相应的各种特性。
（一）精子DNA碎片检测原理：受损的 DNA 再酸的作用下变形成单链，吖啶橙（AO）与双链DNA结合发出绿色荧光，与单链DNA结合发出红光或黄光，通过软件分析断裂DNA的精子细胞百分比。
（二）线粒体膜电位检测原理：精子线粒体为精子运动提供能量，线粒体内膜的膜电位(MMP), 即线粒体通过呼吸链所形成的电化学梯度，是反应线粒体功能的重要指标。MMP正常的精子JC-1 形成J2聚体，发橙色荧光， MMP降低时，JC-1以单体形式存在，发绿色荧光。
（三）精子顶体检测原理：在受精过程中，精子发生顶体反应，释放顶体酶，穿入卵细胞进行受精，完整的顶体结构是精卵结合的基础，其发育和功能障碍会影响受精能力。诱发顶体反应率检测通过Ca²+载体体外诱导精子发生顶体反应，完整的顶体可以结合PSA-FITC；发生顶体反应后的精子具有不完整的顶体，不结合或很少结合PSA，通过流式细胞仪检测相应的荧光，荧光强度与精子顶体完整性呈正比，与诱发顶体反应率(AR)呈反比。
（四）精子活性氧检测原理：生理浓度的活性氧有助于精子获能和顶体反应，但高浓度的ROS则会造成精子DNA的损伤，导致精子DNA产生单链或双链的断裂。DCFH-DA是氧敏感性荧光探针，本身没有荧光，可自由穿过细胞膜，进入细胞后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。

临床应用

(一)精子DNA碎片检测项目

精子染色质结构的完整性对于精确传递遗传物质至关重要。精子DNA损伤能够影响精子的受精能力、受精卵的分裂、胚胎的发育以及子代健康。精子染色质结构分析(SCSA)是检测精子DNA完整性的一种方法。研究显示DFI与PR、精子浓度、精子正常形态率、精子存活率均呈负相关性。提示DFI与精子活力、形态等存在一定的相关性，PR、精子浓度、正常形态率、存活率会随着DFI的增高而降低。但并不能完全说明精子形态正常率、存活率降低，就会损伤精子DNA，但受损的精子DNA会对精子的受精能力造成影响，从而对胚胎发育起到抑制作用。综上所述，DFI增高与不育症的发生联系密切，DFI与PR、精子浓度、精子正常形态率、精子存活率均呈负相关性，在不育症患者病情评估中具有重要的参考价值，值得借鉴[5]。

(二)精子线粒体检测项目

MMP可反映精子质量与线粒体功能之间的密切关系。早在1982年，Evenson等就发现弱精子症患者精子MMP水平较低。研究进一步证实MMP与精子活力、正常形态之间存在相关性)。杨颖等报道弱精子组MMP低于对照组，且MMP与精子活动率、前向运动精子百分率及正常形态精子百分率呈正相关。Zhag等报道正常水平的精子MMP是维持精子顶体酶活性和染色质完整性的生理基础，MMP低的精子不易进行顶体反应。因此，国外学者建议对不明原因不育夫妇且男方精子MMP水平较低时，采用卵细胞质内单精子注射技术(ICSI)治疗。MMP和精子DNA碎片指数(DFI)联合预测女性配偶自然受孕的能力优于精液常规参数，是临床评估特发性男性不育的重要指标[6]。

(三)精子顶体检测项目

精子顶体酶活性可作为精子发生和精子质量的分子标记，并与男性的生育潜力密切相关，可以与其他生物标志物联合检测，如精液参数和精子DNA碎片化指数，对提高男性不育症的诊断敏感性及预测自然妊娠成功的能力起着至关重要的作用[7]。

(四)精子活性氧类物质检测项目

宋晓庆等[8]研究表明，精子DFI值与精子活性氧(ROS)水平存在正相关性，也提示精子DNA损伤可能是由于精液中氧化应激反应造成的。异常形态精子可能是产生氧自由基的重要来源，而高水平精子ROS与精子DNA碎片增多可能有关，它会加速生殖细胞的调亡、导致受精率降低等一系列不良后果。

适用科室

男科、生殖医学科、泌尿外科、妇产科、不孕不育科、检验科

参考文献

[1] 刘祎琳 and 董建军, 男性不育症患者精子DNA碎片指数检测意义. 实用医技杂志, 2024. 31(04): p. 237-240.
[2] 李红林, 傅广波, and 吕述彦, 精子线粒体功能检测与男性不育相关性的研究进展. 临床检验杂志, 2021. 39(04): p. 287-290.
[3] 邱小龙, et al., 精子顶体酶活性在男性生殖中的价值研究进展. 河北医药, 2024. 46(06): p. 914-918.
[4] 宋晓庆, et al., 精子活性氧类物质与其形态及DNA碎片的相关性. 中国计划生育学杂志, 2022. 30(02): p. 387-390.

指南共识

序号	指南/共识名称	要点
1	《精子DNA碎片检测的临床专家共识》	精子DNA碎片(sperm DNA fragmentation,SDF)是一项新的反映精子功能的检测指标。SDF增高常伴发少、弱精子症，也可发生在精液常规指标正常的男性不育症患者。SDF的发生机制复杂。很多文献报道SDF升高与自然妊娠和辅助生殖技术结局存在负相关。因此，近年来SDF检测已广泛应用于男性不育的诊断和治疗。
2	《精子碎片实验室检测与临床应用专家共识——基于流式细胞精子染色质结构分析》	在过去的几十年里，精子DNA碎片(SDF)检测是一项经受住时间考验的精子功能研究技术，在全世界的男科实验室中日益普及。各种体外和体内研究都支持精子DNA完整性在受精、早期胚胎发育、植入和妊娠中的重要性。对于接受辅助生殖技术的患者，SDF已经成为一种新的风险分层生物标志物。
3	《男性生育力评估中国专家共识》	MMP是反映精子线粒体功能的关键指标，反映了精子质量与线粒体功能之间的密切关系。MMP影响精子的活力、获能、AR（顶体反应）和最终受精能力等。
4	《维生素E在男性不育中临床应用专家共识(2014版)》	过多的ROS可以直接氧化损伤生殖细胞及精子，引起精子结构与功能改变，影响精液质量。研究还发现ROS破坏精子DNA的完整性，干扰精卵融合，造成男性不育。
5	《临床实验室精液常规检验中国专家共识》	精子顶体的完整性是体外受精助孕成功的关键之一，顶体结构不完整容易导致顶体反应发生障碍，影响受精，甚至导致男性不育。